Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次注意到口内自身抗体到注意到1改型白血病流行病学腹泻的成效率在儿童时期就有很差的详细描述，多个口内自身抗体乙型肝炎的儿童之前有70%在抗体变换后10年内身患白血病，而随访15年的儿童这一比率上升到84%。来得之下，占流行病学1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的发作程序还没有获得充分的研究课题。

愈发多的人开始用到分期系统来定义1改型白血病的成效：生殖在注意到多种口内自身抗体时重回第1期中，注意到血糖反常时重回第2期中，注意到腹泻时重回第3期中。一些多发口内自身抗体乙型肝炎的生殖，在1期和2期，成效较更慢，并的发展为发作的1改型白血病。我们之前详细描述了一组成员在首次侦测到多种口内自身抗体抽样后大概10年无白血病的极更慢成效者，这组成员病变次数极少，但特质非常明确。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T蛋白反不宜在成效很更慢的病变之前也就是说不存在，但在近期发作和长年存在的白血病病变之前很容易侦测到。这可能确实，与成效病变来得，这些病变自身免疫细胞的通气增强。

20世纪研究课题确实，尽管通气性T蛋白(Treg)数量情况下，但白血病病变存在一些功能原因，其之前仅限于对IL-2的反不宜能够降低。此外，白血病病变之前的物理现象CD4+T蛋白可能对通气更具抵抗性，观感为物理现象T蛋白的可抑制逼近，自然归因于的Treg和基底外归因于的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白之前IL-2反不宜逼近。本研究课题的最终目标是详细描述了CD4+通气性T蛋白(Treg)在一小群极很更慢成效者之前的特质，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群结合的两端研究课题，在21岁以下确诊的病变亲属之前检查1改型白血病的危险原因。我们之前详细描述了长年很更慢成效者的特质，他们依然多重口内自身抗体乙型肝炎超过10年，但没有注意到白血病的流行病学腹泻，更慢性或非神经性自身免疫。随后，10名继续依然无白血病并乐意提供大量体液抽样的很更慢成效者纳入T和B蛋白功能统计分析。在迄今为止的研究课题之前，8名更慢成效者(SP组成员)，之前位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的口内自身抗体乙型肝炎。所有的与会者都正处于1改型白血病成效的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗体对某些抗原的乙型肝炎反不宜，然而，一名病变已经正处于2期大概6年，但没有注意到流行病学腹泻，一名病变被病因为白血病，该患者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之前对该酪氨酸同步进行了直接审核。分开外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白练成和T蛋白可抑制试验审核酪氨酸之前Treg的频带、表改型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类认定、涉及联和转回)同步进行无监督聚类统计分析，审核Treg表改型。

结果：与健康酪氨酸来得，来自更慢成效基底的思绪CD4+T蛋白的监督聚类结果显示，转录的思绪CD4+ Treg频带上升，与糖皮质激素诱导的TNFR涉及蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c急剧下降的病变与成效很更慢者和给定的管控组成员来得，Treg谱并不相同。功能统计分析确实，与健康酪氨酸来得，来自很更慢成效基底的Treg介导的CD4+物理现象T蛋白可抑制明显受到破坏。观感为对物理现象CD4+T蛋白CD25和CD134解读的可抑制上升。

三幅1 深入的表改型统计分析结果显示，CD4+Treg病毒性在更慢成效数据流之前上升。由FlowSOM转换成的Treg一楼，汇聚在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示物解读认定出10个元簇:思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)用到9个相同Treg标示转换成的10个元簇的MST。每个链表都是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在链表组成员周围上色。每个链表之前的饼三幅坚称单个标示的解读级别。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整基底标示解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转换成三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于丰度为每个metacluster装线或三幅(丰度> 0.05%)确切为HD和SP组成员:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白(l)。深蓝色橘色都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模改型证实，Treg频带的上升是成效很更慢的标志。分级旁路(a - f)和水果统计分析(g-k)比较SP与会者和给定的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白上的相同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的都是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分开，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及酪氨酸SP 606(深蓝色)之前CD25+ cd127的频带核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路侄集的装线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)木瓜簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读高强度后处理，标示值得注意的簇被辨别为SP和HD数据流二者之间的相同。(j)装线或三幅结果显示了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员之前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对于丰度(比率)。(k)直方三幅结果显示每个簇的表改型(暗红色)和Treg标示相对于解读与着重解读(蓝色);上列，线或程Treg_3;下面恰巧，线或程Treg_4。着重与所有其他簇之前标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

三幅3 与健康献血者来得，成效很更慢者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T蛋白元簇(思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个解读标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的解读热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之前所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方三幅(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有酪氨酸仅限于，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和给定的HD不仅限于在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR解读，从分级旁路，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，结果显示直方三幅(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

三幅4 来自很更慢成效的CD4+ treg蛋白管控物理现象CD4+T蛋白的能够降低。SP组成员用蓝色的线或和橘色坚称，HD组成员用黑色的线或和橘色坚称，深蓝色的线或/橘色坚称酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按注意到的比率校准。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，指导3在此之后同步进行流式蛋白练成侦测。(a-d)与CD4+接收者者相对于不宜的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。用到乙型肝炎折衷(转录的响不宜蛋白下同treg)计数可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 物理现象CD4+T蛋白对很更慢成效的T蛋白还原的可抑制更敏感。SP组成员用蓝色的线或和橘色坚称，HD组成员用黑色的线或和橘色坚称，深蓝色的线或/橘色坚称酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按注意到的比率校准。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，指导3在此之后同步进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因侄统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同完成指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之前的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自很更慢成效侄的还原思绪CD4+Treg在GITR解读之前获得了引入和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1改型白血病安全性生殖之前的异质性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28